基因敲除小（大）鼠

唯尚立德?lián)碛谐墒旄咝У腡ALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)平臺、完善的模式生物構(gòu)建平臺，完美整合從載體設(shè)計、構(gòu)建、活性鑒定、基因突變動物模型建立等各個環(huán)節(jié)?，F(xiàn)推出小鼠、大鼠等模式生物基因敲除技術(shù)服務(wù)，為客戶提供周期短、性價比高的模式生物構(gòu)建服務(wù)。至今未曾失敗過，我們鄭重承諾失敗將全額退款。

TALEN靶向敲除基因原理簡介

TALE技術(shù)(Transcription activator-like effectors)是一種嶄新的分子生物學工具?？茖W家發(fā)現(xiàn)，來自植物細菌Xanthomonassp的TAL蛋白的核酸結(jié)合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應(yīng)關(guān)系。利用TAL的序列模塊，可組裝成特異結(jié)合任意DNA序列的模塊化蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技術(shù)是基于TALE與人工改造的核酸內(nèi)切酶的切割域(FokI)構(gòu)建針對任意特定核酸靶序列的重組核酸酶。通過TAL的DNA識別域結(jié)合到靶位點上，及FokI切割域形成二聚體后，可特異性對目標DNA序列實現(xiàn)切斷。在隨后的非同源末端連接修復(fù)過程中，斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現(xiàn)目標基因功能的缺失。

CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理簡介

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對特定基因序列進行DNA修飾的技術(shù)。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是細菌和古細菌一種不斷進化適應(yīng)的免疫防御機制。在這系統(tǒng)中，CRISPR對特定DNA的識別是由crRNA或向?qū)NA通過堿基互補配對，定向?qū)ふ夷繕薉NA序列。靶定目標序列后，Cas9蛋白負責對目標DNA進行剪切，造成靶DNA雙鏈斷裂。在隨后的非同源末端連接修復(fù)過程中，斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現(xiàn)目標基因功能的缺失。

TALEN/CRISPR構(gòu)建基因敲除小(大)鼠技術(shù)流程圖

服務(wù)流程及周期

步驟	內(nèi)容	周期
打靶質(zhì)粒構(gòu)建	設(shè)計不同靶點，SNP檢測，組裝TALEN質(zhì)粒2-3對，或3條gRNA，檢測TALEN的SSA活性或gRNA活性	1個月
得到Founder	選擇活性較高的打靶質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)錄成mRNA，顯微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宮，3周后出生，2周齡基因型鑒定。數(shù)量：至少2只	2-3個月
得到F1代雜合子	2個月后性成熟，F(xiàn)ounder和野生型小鼠交配，3周后出生，2周齡基因型鑒定，獲得穩(wěn)定傳代的基因突變雜合子F1代。數(shù)量：2個lines、至少2只/line（性別隨機，若甲方要求一雌一雄，如果第一批F1代小鼠都是同性別，則進行第二次交配，每次交配到生出需3個月，依此類推，直至一雌一雄。）	3-4個月

我們的優(yōu)勢
1、我們已經(jīng)具有4000多對TALEN質(zhì)粒、CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建和活性驗證的成功經(jīng)驗，大量的技術(shù)經(jīng)驗使我們能準確、快速地構(gòu)建出具有體內(nèi)活性的TALEN和CRISPR/Cas9質(zhì)粒。
2、我們具有強大的售前和售后技術(shù)支持團隊，可以為客戶提供免費專業(yè)的技術(shù)支持和方案設(shè)計及拓展。
3、我們已經(jīng)成功使用TALEN及CRISPR/Cas9系統(tǒng)為客戶提供了上百例成功案例，囊括家蠶、斑馬魚、小鼠、大鼠等突變體，至今未曾失敗過，我們的服務(wù)受到了客戶的一致認可。
4、價格低、周期短。我們高效專業(yè)的技術(shù)平臺使得我們能在最短的時間內(nèi)完成模式生物的構(gòu)建服務(wù)。較短的時間使得我們能夠大大的節(jié)約成本，為客戶提供價格最低的服務(wù)